桿狀病毒載體系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于昆蟲細(xì)胞中表達(dá)重組蛋白，它是真核表達(dá)重組蛋白最通用和最強(qiáng)大的系統(tǒng)之一。該系統(tǒng)特別有利于在真核宿主細(xì)胞中大規(guī)模制備重組蛋白。許多真核生物蛋白的翻譯后修飾只能在真核細(xì)胞中發(fā)生（例如糖基化），或者需要真核細(xì)胞環(huán)境來進(jìn)行正確折疊（例如膜蛋白質(zhì)），而原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)卻沒有這些功能。

桿狀病毒是一種雙鏈DNA病毒，通常會(huì)感染昆蟲，特別是鱗翅目昆蟲（moths, butterflies and skippers）。我們的克隆載體pBV是經(jīng)優(yōu)化的，可與來自AcMNPV（Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus）的穿梭載體（稱為Bacmid）一起使用，該穿梭載體的野生型基因組大小為134 kb。

首先將目的基因克隆到含有強(qiáng)啟動(dòng)子的pBV載體上，目的基因表達(dá)盒與慶大霉素抗性基因的側(cè)翼序列為Tn7轉(zhuǎn)座子末端元件Tn7L和Tn7R。然后，將該載體轉(zhuǎn)化到攜帶Bacmid穿梭載體和輔助質(zhì)粒的大腸桿菌中。Bacmid穿梭載體是一個(gè)非常大的質(zhì)粒，含有經(jīng)修飾后攜帶lacZ基因的桿狀病毒基因組和插入lacZ基因編碼區(qū)的mini-attTn7位點(diǎn)。輔助質(zhì)粒可以表達(dá)Tn7轉(zhuǎn)座酶，由轉(zhuǎn)座酶介導(dǎo)pBV載體上Tn7R和Tn7L的之間的區(qū)域轉(zhuǎn)座到mini-attTn7位點(diǎn)，Tn7R和Tn7L的之間的區(qū)域是目的基因和慶大霉素抗性基因的表達(dá)盒。通過慶大霉素篩選和藍(lán)/白篩選鑒定出重組的陽性克?。ㄓ捎趌acZ表達(dá)，非重組菌落為藍(lán)色，而由于轉(zhuǎn)座子插入破壞lacZ，重組菌落為白色），純化的重組Bacmid DNA可用于轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞以產(chǎn)生活的桿狀病毒，進(jìn)而產(chǎn)生目的重組蛋白。

最常用的桿狀病毒重組蛋白表達(dá)細(xì)胞系是Sf9，來源于草地貪夜蛾（fall armyworm）的卵巢組織。該細(xì)胞系適用于各種培養(yǎng)條件，包括懸浮或單細(xì)胞培養(yǎng)以及無血清培養(yǎng)基。幼蟲和其他鱗翅目細(xì)胞系也被廣泛使用，也有一些關(guān)于桿狀病毒可應(yīng)用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的報(bào)道。

有關(guān)該載體系統(tǒng)的更多信息，請參考以下文獻(xiàn)。

我們的桿狀病毒重組蛋白表達(dá)載體系統(tǒng)能夠在昆蟲細(xì)胞中高效生產(chǎn)重組蛋白，該系統(tǒng)表達(dá)的蛋白具有真核細(xì)胞的翻譯后加工特征，且能夠進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用。

真核系統(tǒng)：昆蟲細(xì)胞可進(jìn)行類似于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的蛋白翻譯后加工。因此，我們的系統(tǒng)特別適用于表達(dá)需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)錄后加工的真核生物蛋白，而原核表達(dá)系統(tǒng)并不具備這一功能，如共價(jià)修飾或膜定位。

高水平表達(dá)和可溶性：在大多數(shù)情況下，目的蛋白是高度表達(dá)的，可溶性的，并且可以很容易地從感染細(xì)胞中進(jìn)行純化回收。

易于放大規(guī)模：在我們的系統(tǒng)中，獲得的初始桿狀病毒可用于感染更多細(xì)胞以進(jìn)一步提高病毒滴度。因此，利用我們的系統(tǒng)易于放大蛋白生產(chǎn)規(guī)模。

懸浮培養(yǎng)：Sf9和其他鱗翅目細(xì)胞系易于懸浮培養(yǎng)，使其能夠在生物反應(yīng)器中大規(guī)模生產(chǎn)重組蛋白。

安全性：桿狀病毒不能在除了昆蟲細(xì)胞以外的細(xì)胞進(jìn)行復(fù)制，對哺乳動(dòng)物和植物無致病性。因此，可以在最小生物安全條件下使用我們的桿狀病毒重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)。

技術(shù)復(fù)雜：使用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行蛋白生產(chǎn)需要多個(gè)步驟，包括將目的基因克隆到pBV載體上，產(chǎn)生重組Bacmid，并將重組Bacmid DNA轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞。相對于細(xì)菌重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)，該系統(tǒng)對技術(shù)要求更高，且耗時(shí)更久。在訂購載體的同時(shí)，可以通過訂購我們的重組Bacmid制備和病毒包裝服務(wù)輕松解決這些問題。

PH promoter: AcMNPV polyhedrin promoter. It drives high-level expression of the gene encoding your recombinant protein.

ORF: The open reading frame of your gene of interest is placed here.

SV40 early pA: Simian virus 40 early polyadenylation signal. It facilitates transcriptional termination of the upstream ORF.

Tn7L: Tn7 transposon left terminal element. It is recognized by Tn7 transposase. DNA flanked by Tn7R and Tn7L can be transposed by Tn7 transposase into attTn7 docking sites.

Ampicillin: Ampicillin resistance gene. It allows the plasmid to be maintained by ampicillin selection in E. coli.

pUC ori: pUC origin of replication. Plasmids carrying this origin exist in high copy numbers in E. coli.

Tn7R: Tn7 transposon right terminal element. It is recognized by Tn7 transposase. DNA flanked by Tn7R and Tn7L can be transposed by Tn7 transposase into attTn7 docking sites.

Gentamicin: Gentamicin resistance gene. It allows for drug selection of E. coli carrying recombinant bacmids.